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    2. 國(guó)家獸藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新聯(lián)盟
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      科研動(dòng)態(tài)

      非洲豬瘟的診斷技術(shù)與疫苗研發(fā)

      時(shí)間:2024-07-25   訪問(wèn)量:1035


      非洲豬瘟是一種高度傳染性的豬類病毒性疾病,病死率可達(dá)到100%,對(duì)家豬種群和全球豬肉產(chǎn)業(yè)造成毀滅性打擊。非洲豬瘟存在于非洲、歐洲、亞洲、大洋洲和美洲(加勒比地區(qū)),是全球農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)面臨的主要威脅之一。

      快速可靠的診斷方法對(duì)于控制非洲豬瘟至關(guān)重要,實(shí)驗(yàn)室診斷方法包括紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)和分子檢測(cè)技術(shù)。疫苗是控制和預(yù)防非洲豬瘟的最佳策略,當(dāng)前全球尚無(wú)注冊(cè)疫苗可用。

      • 非洲豬瘟的診斷

      由于家豬感染非洲豬瘟病毒的致命后果,可靠和快速的診斷方法非常重要。當(dāng)疾病傳播到鄰國(guó)或地方農(nóng)場(chǎng)時(shí),臨床病理診斷非常重要。養(yǎng)殖場(chǎng)獸醫(yī)和官方獸醫(yī)服務(wù)部門應(yīng)了解疾病的情況和典型特征,以便進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷和確診。豬瘟可能引發(fā)與非洲豬瘟相似的臨床癥狀和病變,甚至可能導(dǎo)致相似的死亡率,因此非洲豬瘟幾十年來(lái)一直與豬瘟進(jìn)行鑒別診斷。最近在亞洲和東歐出現(xiàn)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)也添加到了非洲豬瘟的潛在臨床病理學(xué)鑒別診斷中,因?yàn)槭芨腥镜膭?dòng)物可表現(xiàn)出高發(fā)病率和死亡率、出血和淋巴耗竭。
      在過(guò)去幾年中,隨著該疾病的迅速蔓延,非洲豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷有了根本性的進(jìn)步。幾十年來(lái),紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)一直是非洲豬瘟病毒(ASFV的基本診斷技術(shù)。它用于ASFV的確診,但需要專門的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行原代細(xì)胞制備,并且需要一周以上的時(shí)間才能獲得結(jié)果,通常用于參考實(shí)驗(yàn)室。此外,由于EP402R基因的缺失,一些ASFV分離株不能吸附紅細(xì)胞,該基因編碼負(fù)責(zé)吸附紅細(xì)胞的 CD2v 蛋白。
      ASFV 核酸分子檢測(cè)具有高靈敏度和特異性,是全球應(yīng)用最多,并被 WOAH 推薦。通常,核酸檢測(cè)分子的方法靶向ASFV基因組中編碼衣殼蛋白p72B646L基因)的高度保守區(qū)域。實(shí)時(shí)熒光定量PCR被廣泛認(rèn)為是檢測(cè)診斷樣本中ASFV核酸的金標(biāo)準(zhǔn),但等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)因其快速、不需要熱擴(kuò)增而越來(lái)越受歡迎。最近描述了新的等溫?cái)U(kuò)增方法,包括環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)、滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)(RCA)和重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)用于 ASFV 檢測(cè)。此外,通過(guò)基因編輯技術(shù)工程化的CRISPR相關(guān)蛋白是診斷非洲豬瘟的有前途的下一代工具。
      檢測(cè)外周血的ASFV抗體是檢測(cè)和監(jiān)測(cè)ASF的另一種重要方法,WOAH 推薦使用某些抗體免疫測(cè)定法。在這些診斷技術(shù)中,ELISA已被廣泛應(yīng)用。最近還開發(fā)了用于現(xiàn)場(chǎng)的側(cè)向?qū)游鲅b置,顯示出良好的靈敏度和特異性。然而,大多數(shù)患有急性臨床病程的動(dòng)物,即在當(dāng)前大流行期間觀察到了典型病程,但在血清轉(zhuǎn)換發(fā)生之前死亡,使得抗體測(cè)試在許多情況下不太有用。

      • 非洲豬瘟的防控措施和疫苗研發(fā)

      預(yù)防是防止非洲豬瘟進(jìn)入無(wú)非洲豬瘟地區(qū)或國(guó)家的最重要策略。監(jiān)測(cè)家豬和野豬種群是預(yù)防非洲豬瘟的關(guān)鍵措施,許多國(guó)家已經(jīng)實(shí)施了強(qiáng)有力的監(jiān)測(cè)計(jì)劃。將非洲豬瘟病毒引入新領(lǐng)土有許多潛在途徑,包括動(dòng)物和豬肉產(chǎn)品的合法和非法流動(dòng),這些動(dòng)物和豬肉制品可以長(zhǎng)距離傳播,也可以通過(guò)受感染的野豬傳播。一旦一個(gè)國(guó)家出現(xiàn)疾病,就會(huì)使用多種控制工具來(lái)根除該疾病。這些措施包括強(qiáng)有力的診斷、改善生物安全、消除受感染的動(dòng)物以及限制動(dòng)物/污染物的移動(dòng)。在過(guò)去的一個(gè)世紀(jì)里,這些措施已成功地用于根除歐洲的非洲豬瘟及其在美國(guó)的傳播。然而,非洲豬瘟已成為一種流行病,控制和根除措施有一定的局限性。
      研究有效和安全疫苗對(duì)于非洲豬瘟的控制至關(guān)重要。疫苗接種策略不應(yīng)用作控制非洲豬瘟的獨(dú)立干預(yù)措施,而應(yīng)在完善的規(guī)劃下進(jìn)行,同時(shí)對(duì)疾病和生物安全進(jìn)行疫苗接種后的監(jiān)測(cè)。
      滅活、亞單位、mRNADNA或病毒載體的候選疫苗不能提供有效和可靠的保護(hù),只有少數(shù)報(bào)告顯示對(duì)ASFV攻擊有一定的保護(hù)作用。只有一份報(bào)告顯示,使用八種不同的ASFV抗原庫(kù)中的中等毒力分離株進(jìn)行攻擊后,保護(hù)率為100%。
      減毒疫苗策略更具有可行性,當(dāng)豬免疫并在毒力菌株攻擊后存活時(shí)顯示出良好的保護(hù)作用。然而,人們擔(dān)心潛在的毒力逆轉(zhuǎn),在臨床使用疫苗之前,有必要進(jìn)行深入的安全性研究。由于減毒活疫苗可以在宿主體內(nèi)成功復(fù)制,因此會(huì)觸發(fā)體液和細(xì)胞反應(yīng),并且不需要具有共刺激活性的佐劑來(lái)增強(qiáng)免疫反應(yīng)的質(zhì)量和強(qiáng)度。
       1960年代的第一次實(shí)驗(yàn)開始,減毒活疫苗已顯示出對(duì)同源ASFV攻擊的潛在保護(hù)作用,但對(duì)異源分離株沒(méi)有保護(hù)作用。然而,這些初步的疫苗接種嘗試也引起了安全問(wèn)題,因?yàn)橐恍﹦?dòng)物不會(huì)受到保護(hù),并且觀察到具有死亡率和/或臨床癥狀和病變。
      通過(guò)缺失各種基因來(lái)減弱非洲豬瘟病毒已被廣泛報(bào)道。通過(guò)刪除I177L基因,開發(fā)了一種高效的減毒疫苗,在中等或更高劑量下實(shí)現(xiàn)消除性免疫,保護(hù)豬免受歐亞大陸流行的強(qiáng)毒株的侵害。該疫苗已獲準(zhǔn)在越南與另一種在多基因家族MGF)缺失疫苗一起使用。自然減毒的ASFV分離株也顯示出作為候選疫苗的潛力,顯示出對(duì)同源或異源ASFV攻擊的部分和/或全部保護(hù)作用。
      2021年,在首次報(bào)告Georgia07樣基因型II毒株三年后,基因型I ASFV在中國(guó)出現(xiàn),并開始引起慢性感染、低毒力和有效傳播性,與葡萄牙減毒的NH/P68OURT88/3分離株有許多相似之處。2021 年,中國(guó)發(fā)現(xiàn)了基因 I 型和 II  AFSV 重組體,這給疫苗開發(fā)帶來(lái)了新的挑戰(zhàn),因?yàn)橐恍┗诨蛐?span style=";padding: 0px;outline: 0px;max-width: 100%;box-sizing: border-box !important;overflow-wrap: break-word !important"> II 的重組減毒疫苗對(duì)基因型 II 分離株顯示出良好的保護(hù)作用,但對(duì)基因型 I/II 重組毒力菌株沒(méi)有表現(xiàn)出良好的保護(hù)作用。
      使用不合規(guī)和劣質(zhì)疫苗對(duì)養(yǎng)豬業(yè)構(gòu)成重大風(fēng)險(xiǎn)。20世紀(jì)伊比利亞半島慢性臨床病程的出現(xiàn)與使用失敗的疫苗接種策略有關(guān)。此外,這些疫苗可以與田間分離株重新結(jié)合,產(chǎn)生新的菌株,這些菌株可以逃避當(dāng)前的診斷技術(shù)并導(dǎo)致豬場(chǎng)的持續(xù)感染。
      本文來(lái)源于《Virulence》雜志上的綜述文章“Pathogenicity and virulence of African swine fever virus”。
      論文鏈接:
      https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC11232652/










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